Caracterización de la infección por Bordetella pertussis, Bordetella spp. y coqueluche en la provincia de Córdoba, Argentina / Features of Bordetella pertussis, Bordetella spp. infection and whopping cough in Córdoba province, Argentina

Introduction: Whooping cough is a re-emerging infection in the world and Latin America. Objective: It was considered relevant to investigate the clinical and epidemiological profile of Bordetella spp. and Bordetella pertussis infection in Córdoba province, Argentina; evaluating, at the same time, the co-infection with virus producing respiratory infections that may be confused with whooping cough. Material and Methods: All whooping cough suspected cases were studied by Polimerase Chain Reaction, amplifying the repeated insertion sequence (IS) 481 and the promoter gene encoding pertussis toxin, between 2011 and 2013. The data were obtained from the clinical and epidemiological records. Results: From 2,588 whooping cough suspected cases, 11.59% was infected by Bordetella spp. and 9.16% was confirmed as Bordetella pertussis infection. The rate of infection was 7.22 and 1.84 per 100,000 for 2011 and 2012, respectively. The infection presented a seasonal tendency and it was mainly found on the group of children between 13 and 24 months old. The co-infection with virus producing respiratory infections, were uncommon. Paroxysmal cough, cyanosis and/or vomiting were predictors of the infection for Bordetella pertussis. Discussion and Conclusions: To deal with the re-emergence of whooping cough is important the knowledge of the regional epidemiological situation. This paper shows the situation of these infections in the regional clinical and epidemiological context, and makes the information available for health decision-making.

Introducción: Coqueluche es una enfermedad reemergente en el mundo y en Latinoamérica. Objetivo: Resultó de interés caracterizar el perfil clínico-epidemiológico de la infección por Bordetella spp. y Bordetella pertussis en Córdoba, Argentina; evaluando además, la frecuencia de infecciones de etiología viral que, por cursar con un síndrome coqueluchoide (SC), pueden ser confundidas con cuadros de coqueluche. Material y Métodos: Los casos sospechosos de coqueluche, se estudiaron por reacción de polimerasa en cadena; amplificando la secuencia repetida de inserción (IS) 481 y la región promotora del gen de la toxina pertussis; entre 2011 y 2013. Los datos de los pacientes se obtuvieron de las fichas clínicoepidemiológicas. Resultados: De 2.588 pacientes, 11,59% presentó una infección por Bordetella spp. y en 9,16% se confirmó una infección por Bordetella pertussis. La tasa de infección fue 7,22 y 1,84 por 100.000 habitantes en 2011 y 2012, respectivamente. La infección presentó una tendencia estacional y se concentró principalmente en niños entre 13 y 24 meses. La tos paroxística, cianosis y/o vómitos fueron predictores de la infección por B. pertussis. La coinfección con virus productores de infecciones respiratorias fue poco frecuente. Discusión y Conclusiones: Es fundamental el conocimiento de la situación epidemiológica regional. Este trabajo presenta la situación de Córdoba y pone a disposición de la comunidad sanitaria la información para la toma de decisiones en el contexto clínico-epidemiológico regional.

Implementación del ensayo de carga viral COBAS Taqman HIV-1 Test, v1. 0, para el diagnóstico de la infección congénita por HIV-1 / Implementation of the viral load assay COBAS Taqman HIV-1 Test, v1.0, for the diagnosis of congenital HIV-1 infection

La transmisión vertical es la principal vía de contagio del HIV en la edad pediátrica. El diagnóstico de la infección congénita antes de los 18meses se realiza mediante ensayos virológicos: detección de genoma viral como ARN plasmático y ADN proviral. La sensibilidad de estos ensayos varía según la edad del niño, con valores de especificidad mayores al 95%. El objetivo de este trabajo fue evaluar el desempeño del ensayo de carga viral (CV) COBAS Taqman HIV-1 Test, v1.0 (Roche), y su concordancia con una PCR múltiple anidada in-house para la detección del ADN proviral. De 341 muestras procesadas, 15 resultaron positivas y 326 negativas por ambas metodologías. Para la metodología de CV, la sensibilidad general fue del 88,2% y la especificidad del 100%. Nuestros resultados indican que la metodología de CV evaluada puede utilizarse como técnica alternativa para el diagnóstico de infección congénita por HIV

Vertical transmission is the main route of HIV infection in childhood. Because of the persistence of maternal HIV antibodies, virologic assays that directly detect HIV are required to diagnose HIV infection in infants younger than 18months of age. The sensitivity of HIV RNA/DNA assays increases as the child becomes older. These tests have specificity values greater than 95%. The aim of this study was to evaluate the performance of the COBAS Taqman HIV-1 Test, v1.0 assay (Roche) and its concordance with a Multiplex Nested-PCR. Of 341 samples processed, 15 were positive and 326 negative by both methods. Sensitivity and specificity overall values for the viral load assay were 88.2% and 100%, respectively. Our results indicate that the COBAS Taqman assay evaluated could be used as an alternative method to diagnose HIV congenital infection

Sensibilidad del equipo Cobas AmpliScreenTM HIV-1 Test, v1. 5, para la detección de HIV-1 / Sensitivity of the COBAS AmpliScreenTM HIV-1 Test v1.5 for HIV-1 detection

Las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (NAT) se incorporaron en los bancos de sangre para reducir el riesgo residual de transmisión de infecciones por vía transfusional. La cocirculación de distintas variantes del HIV-1 en Argentina indica la necesidad de evaluar la sensibilidad de los ensayos serológicos y moleculares disponibles para su detección. En este trabajo se evaluó la sensibilidad del equipo COBAS AmpliScreenTM HIV-1 Test, versión 1.5 (Roche), para detectar ARN viral en plasmas de individuos infectados con HIV-1 de Argentina. Los resultados demuestran que esta técnica tiene una alta sensibilidad para detectar ARN de HIV-1 en las condiciones ensayadas: para ensayo de mini-pooles (pooles ≥ 50 copias de ARN/ml), la sensibilidad fue ≥ 92 %, y para procedimiento estándar (plasmas ≥ 207 copias de ARN/ml), la sensibilidad fue 100 %. Además, la técnica COBAS AmpliScreenTM HIV-1 Test, versión 1.5 (Roche), es adecuada para la detección de las variantes de HIV-1 prevalentes

The introduction of nucleic acid amplification techniques (NAT) in blood banks was intended to reduce the residual risk of transfusion-transmitted infections. Co-circulation of a great diversity of HIV-1 variants in Argentina portrays the need to assess the sensitivity of serological and molecular assays available for their detection. In this study, we evaluated the sensitivity of the COBAS AmpliScreenTM HIV-1 Test, version 1.5 (Roche) for the detection of HIV-1 RNA in plasma samples of infected individuals from Argentina. The results of this study reveal that this technique has high sensitivity for the detection of HIV-1 RNA under assay conditions: using mini-pool testing, pools ≥ 50 RNA copies per ml achieved ≥ 92 % sensitivity, whereas in the standard procedure, samples ≥ 207 RNA copies/ ml achieved 100 % sensitivity. Moreover, the COBAS AmpliScreenTM HIV-1 Test, version 1.5 (Roche) is suitable for detecting prevailing HIV-1 variants

Diagnóstico serológico de HTLV-1/2: combinación de técnicas de tamizaje para definir el estatus serológico en donantes de sangre / [Serological diagnosis of HTLV-1/2: combination of screening assays to define the serological status in blood donors].

Alternative algorithms were evaluated in order to reduce the number of false reactive results for antibodies against HTLV-1/2. From 20,210 samples tested, 0.37

(74/20,210) was reactive by ELISA Murex. Of these, 23 were confirmed as positive by the indirect immunofluorescence assay whereas 51 were negative, being the positive predictive value (PPV) 31.08

. From a combination of the ELISA Murex assay with the particle agglutination assay (PA) and ELISA MP, the following results were obtained: 26/74 were reactive by ELISA Murex and PA, PPV 88.5

and 32/74 were reactive by ELISA Murex and ELISA MP, PPV 71.8

. The ROC curve analysis determined that for an RP 4.74, the values for sensitivity, specificity, PPV and NPV by ELISA Murex were 100

, respectively. We propose that reactive samples by ELISA Murex with an RP d 4.74 should be retested in duplicate by PA, and the resulting concordantly nonreactive samples should be defined as negative for HTLV-1/2.

Performance of a commercial assay for the diagnosis of influenza A (H1N1) infection in comparison to the Centers for Disease Control and Prevention protocol of real time RT-PCR / Evaluación del desempeño de un equipo comercial para el diagnóstico de influenza A (H1N1) en comparación con el protocolo de RT-PCR en tiempo real diseñado por los Centros de Control y Prevención de Enfermedades (CDC)

At the time of influenza A (H1N1) emergency, the WHO responded with remarkable speed by releasing guidelines and a protocol for a real-time RT-PCR assay (rRT-PCR). The aim of the present study was to evalúate the performance of the "Real Time Ready Influenza A/H1N1 Detection Set" (June 2009)-Roche kit in comparison to the CDC reference rRT-PCR protocol. The overall sensitivity of the Roche assay for detection of the Inf A gene in the presence or absence of the H1 gene was 74.5 %. The sensitivity for detecting samples that were only positive for the Inf A gene (absence of the H1 gene) was 53.3 % whereas the sensitivity for H1N1-positive samples (presence of the Inf A gene and any other swine gene) was 76.4 %. The specificity of the assay was 97.1 %. A new version of the kit (November 2009) is now available, and a recent evaluation of its performance showed good sensitivity to detect pandemic H1N1 compared to other molecular assays.

Durante la pandemia de influenza A (H1N1), la OMS recomendó algoritmos y protocolos de detección del virus mediante RT-PCR en tiempo real. El objetivo del presente estudio fue evaluar el desempeño del equipo que comercializa la empresa Roche, Real Time Ready Influenza A/H1N1 Detection Set (junio de 2009), en comparación con el protocolo de RT-PCR en tiempo real de los CDC. La sensibilidad global del ensayo de Roche para la detección del gen Inf A en presencia o ausencia del gen H1 fue 74,5 %. La sensibilidad para la detección de muestras positivas solo para el gen Inf A (ausencia del gen H1) fue 53,3 % y la sensibilidad para la detección de muestras positivas para H1N1 (presencia del gen Inf A y cualquier otro gen porcino) fue 76,4 %. La especificidad fue 97,1 %. Existe una nueva versión del equipo (noviembre 2009) que, según se ha descrito, presenta buena sensibilidad en comparación con otros ensayos moleculares para detectar H1N1 pandémica.

Evaluation of five screening tests licensed in Argentina for detection of hepatitis C virus antibodies

This study was conducted to compare among the most recent generation of five screening tests licensed in Argentina, in order to evaluate which of the tests has the best sensitivity for detection of antibodies against hepatitis C virus (HCV). The tests analyzed were: Detect-HCV™ (3.0) Biochem ImmunoSystems, Canada; Hepatitis C EIA Wiener Lab., Argentina; Equipar HCV Ab, Italy; Murex HCV 4.0, UK and Serodia-HCV particles agglutination test, Japan. The results obtained showed high discrepancy between the different kits used and show that some of the tests assessed have a low sensitivity for anti-HCV detection in both chronic infections and early seroconversion, and indicate that among the commercially available kits in Argentina, Murex HCV 4.0 (UK) and Serodia-HCV particles agglutination test (Japan) have the best sensitivity for HCV screening. Although the sensitivity of the assays is the first parameter to be considered for blood screening, more studies should be carried out to assess the specificity of such assays.

Propuesta de un algoritmo alternativo con pruebas complementarias en donantes con resultados reactivos en pruebas de tamizaje para HIV / HIV screening test. An alternative algorithm of complementary tests in seroactive donors

En este trabajo se presentan los resultados de la experiencia del Banco de Sangre de la Universidad Nacional de Córdoba con el uso de equipos de 4ª generación en el screening de HIV y la valoración de la eficiencia del mismo utilizando diferentes técnicas serológicas y PCR. Además se propone un algoritmo para ser implementado en bancos de sangre con el fin de minimizar el descarte de bolsas y aclarar el status para HIV en los donantes con screening inicial reactivo. De 3822 donantes de sangre procesados por HIV Ag/Ac Combination ABBOTT Murex se descartaron 30 unidades de sangre repetidamente reactivas y repetidamente en zona gris, de las cuales solamente en 2 se confirmó infección por HIV. Las 30 muestras fueron procesadas por las siguientes técnicas: Murex HIV-1.2.0 ABBOT Murex (EIE), Murex HIV Antigen Mab ABBOTT Murex (EIE), Microelisa system Vironostika HIV Uni- Form II plus O BIOMÉRIEUX, SFD HIV 1/2 PA BIORAD FUJIREBIO (aglutinación de partículas de gelatina o APG), NEW LAV BLOT I BIO-RAD (Western Blot o WB), IFI-HIV-1-BIO-MANGUINHOS y PCR "in house". La detección de anticuerpos (3ª generación) y del antígeno p24 por separado con el reactivo ABBOTT Murex resultó en 10 muestras repetidamente reactivas y en zona gris para los anticuerpos y 1 repetidamente reactiva para el antígeno. Por Western blot, de las 30 muestras 2 fueron positivas, 6 negativas y 22 indeterminadas. Con el ensayo de 4ª generación utilizado hubo 0,73 por ciento de falsos positivos lo que determinó un descarte innecesario de unidades de sangre y un estado de incertidumbre para el donante. La PCR fue de gran utilidad para resolver el diagnóstico en donantes con resultados discordantes por los inmunoensayos. Consideramos que la estrategia propuesta resulta útil hasta que sea posible la incorporación de NAT para el screening de HIV en nuestros bancos de sangre.

Técnicas moleculares como herramientas para el tamizaje viral. Estado actual del desarrollo de una técnica de RT-Multiplex-Nested PCR para el control de HIV en sangre / Molecular techniques for viral screening. RT-Multiplex-Nested PCR for HIV control in blood

Los índices de morbilidad y mortalidad en receptores de sangre aumentan drásticamente debido a la transmisión de infecciones virales por vía transfusional. Entre los virus transmitidos por sangre, el de mayor impacto sanitario y social es el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1). A pesar de que la implementación del tamizaje de anticuerpos para HIV en los Bancos de Sangre de Argentina ha permitido reducir considerablemente la transmisión del virus por vía sanguínea, existe en la actualidad evidencia suficiente de la transmisión de HIV por unidades de sangre con serología negativa. En los Bancos de Sangre de la mayoría de los países europeos y en los Estados Unidos se utilizan, desde el año 1999, técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (NAT) para detectar HIV y HCV, con el fin de reducir el período de ventana inmunológica. En este trabajo realizamos una actualización del uso de las técnicas moleculares como herramientas de tamizaje de HIV en la sangre destinada a transfusión y presentamos los resultados preliminares obtenidos a partir del desarrollo de una técnica molecular artesanal: transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa anidada (RT-Multiplex-Nested PCR), de alta sensibilidad y de bajo costo. Los resultados obtenidos demuestran que la sensibilidad y la especificidad de esta técnica para detectar cepas de HIV regionales están dentro de los límites establecidos por las reglamentaciones internacionales. En esta etapa del trabajo se está realizando la validación de la técnica desarrollada utilizando estándares internacionales. Esta última técnica podrá ser utilizada para el control de la sangre en Córdoba, con el fin de reducir el riesgo de transmisión del virus HIV por esta vía.

Usefulness of a Nested-polymerase chain reaction for molecular diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type I/II

This study aimed at implementing a Nested-polymerase chain reaction (Nested-PCR) for the molecular diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type I/II (HTLV-I and HTLV-II) infections in peripheral blood mononuclear cells of infected subjects in Argentina. The sensitivity and specificity of the assay for the detection of regional strains were assessed by comparing them with the molecular assay of reference PCR-hybridization. The Nested-PCR detected 1 MT-2 cell ( 8 proviral copies)/1x106 non-infected cells showing high sensitivity for provirus detection. While both molecular assays showed high specificity (100 percent) for HTLV-I and HTLV-II detection, the sensitivity values differed: 100 percent for Nested-PCR and 67 percent for PCR-hybridization assay. Moreover, this technique showed less sensitivity for the detection of DNA sequences of HTLV-II (33 percent) than for the detection of DNA sequences of HTLV-I (75 percent). The high sensitivity and specificity of the Nested-PCR for regional strains and its low costs indicate that this assay could replace the PCR-hybridization assay for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections. It will be interesting to assess the usefulness of this assay as a tool for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections in other developing countries. Other studies that include a greater number of samples should be conducted.

Screening de HIV en bancos de sangre: evaluacion de los equinos de cuarta generacion / Screening of HIV in blood banks: evaluation of fourth generation kits

La determinación de Ag p24 del virus HIV es recomendada por la Asociación Argentina de Hemoterapiae Inmunohematología para el tamizaje de HIV en los bancos de sangre de Argentina. La implementación de dicha determinación en el banco de sangre de la Universidad Nacional de Córdoba (UNC) implicó un costo elevadopara el nulo beneficio obtenido. Se evaluó la eficiencia del ensayo combinado Ag/Ac ELISA de 4ta generaciónpara el screening de HIV, en comparación a la estrategia actualmente utilizada en el banco de sangre de la UNC(ELISA 3ra generación + ELISA Ag p24). Se utilizaron 11 muestras de suero de pacientes infectados con HIV enetapa temprana de seroconversión, 27 muestras de suero de individuos infectados en etapa asintomática de la infección y 39 muestras de suero de individuos no infectados. Se demostró igual sensibilidad (100%) y una especificidad menor para el equipo de 4ta generación (95.1%) frente al equipo de 3ra generación (97.5%). El ensayo de Ag p24 falló en la detección de 2 muestras HIV tempranas. La alta sensibilidad y especificidad demostradas por los equipos de 3ra y 4ta generación, indica que ambos son adecuados para el tamizaje de HIV en bancos de sangre. Sin embargo, el ELISA de 4ta generación podría ser implementado en los bancos de sangre regionales como una alternativa de menor costo a la estrategia actualmente utilizada. Esta alternativa resulta viable hasta tanto sea posible incorporar en los bancos de sangre la detección de ARN de HIV por técnicas moleculares.

Creencias y costumbres en el cuidado del recién nacido y la Influencia en su salud, en la comuna 5 de la ciudad de Manizales / Beliefs and customs in neonatal care and its influence on the newborn’s health, in the Comuna 5 of Manizales

Se realizó un estudio de tipo cualitativo con diez madres de la comuna 5 de la ciudad de Manizales, con el objetivo de identificar cuáles son las creencias y costumbres practicadas en relación con el cuidado del recién nacido y como influyen en su salud; a fin de recomendar estrategias de promoción y prevención. Para ello se aplicó una entrevista abierta en la cual la madre podía expresar sus conocimientos y experiencias acerca del tema a investigar. Los resultados más relevantes que se encontraron fue la mayor presencia de factores de riesgo tales como:– No lactancia materna exclusiva.– Uso de fajeros y sustancias distintas al alcohol para la limpieza del muñón umbilical.– Uso de lociones y talcos en la piel del recién nacido. Asociados a déficit de conocimientos sobre los cuidados adecuados, y cierta presión de tipo familiar. Pese a ello, las madres aceptan y practican recomendaciones del personal de salud.Se encontró el uso de prácticas protectoras como; Hábitos higiénicos generales en el manejo del bebé y esquema de inmunizaciones completo para la edad. Estos hallazgos orientan al personal de salud a mejorar y reforzar los programas educativos dirigidos a ésta población y motivar a éstos a una mayor participación.

Immunofluorescence assay reactivity patterns of serum samples presenting indeterminate Western blot results for antibodies to HIV-1 and HTLV-I/II in Cordoba, Argentina

Serum samples (n: 110) from blood donors and high risk individuals from Cordoba, Argentina with indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb profiles were studied for specific antibodies to HTLV-I/II and HIV-1 by indirect immunofluorescence assay (IFA) and for the presence or absence of HIV-1 and HTLV-I/II specific bands by Wb. This study was carried out in order to characterize their putative reactions with HIV-1 and HTLV-I/II proteins and to resolve the retrovirus infection status of these individuals. Results indicated that blood donors sera displaying indeterminate HIV-1 or HTLV-I/II Wb patterns were not immunoreactive to HTLV-I/II and HIV-1 on IFA. However, a high rate of indeterminate HIV-1 and HTLV-I/II Wb samples from high risk individuals had positive HTLV-I/II and HIV-1 IFA results respectively. Our study supports the growing evidence that HTLV-HIV indeterminate seroreactivity in low risk population is due to a cross reaction against nonviral antigens, and in high risk populations the indeterminate samples show serological cross-recognition between HIV-1 proteins and HTLV-I/II proteins on Wb. These results point out the necessity to investigate the HTLV-I/II reactivity in indeterminate HIV-1 samples and viceversa in order to confirm the diagnosis. Finally, this study shows the potential usefulness of IFA in elucidating the status of HIV-1 and HTLV-I/II infection of individuals with indeterminate Wb profiles, thus enabling resolution of retrovirus infection status

Efficiency of indirect immunofluorescence assay as a confirmatory test for the diagnosis of human retrovirus infection (HIV-1 and HTLV-I/II) in different at risk populations

Avaliou-se a eficiencia da tecnica de immunofluorescencia indireta (IFI) como metodo confirmatorio no diagnostico da infeccao por HIV-1 e HTLV-I/II. Para isto, processaram-se amostras com sorologia positiva ou negativa por Western blot (Wb) para ambos virus, pertencentes a populacoes em diferentes graus de risco de adquirir a infecao e determinaram-se os valores de sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo e o indice de concordancia Kappa da IFI para cada sistema viral em comparacao com o Wb. Como fontes de antigenos da IFI empregaram-se as linhas celulares H9 (HTLV-III b), MT-2 e MT-4 (persistentemente infectadas com HTLV-I), MO-T (persistentemente infectadas com HTLV-II). Os valores globais de sensibilidade e especificidade para o sistema HIV-1, foram 96,80 por cento e 98,60 por cento respectivamente, enquanto os valores preditivos positivo e negativo 99,50 por cento e 92,00 por cento respectivamente...